Pangunahing Pagkakaiba - Cloning Vector vs Expression Vector

Ang cloning vector at expression vector ay dalawang uri ng mga vector, na ginagamit sa recombinant na teknolohiya ng DNA upang magdala ng mga banyagang segment ng DNA sa isang target na cell. Ang parehong pag-clone at expression vector ay binubuo ng pinagmulan ng pagtitiklop, natatanging mga site ng paghihigpit, at mapipiling marker gene sa kanilang mga pagkakasunud-sunod ng vector. Ang parehong mga cloning at expression vector ay self-replicative dahil sa pagkakaroon ng isang pinagmulan ng pagtitiklop. Ang pag-clone ng mga vector ay maaaring alinman sa mga plasmid, cosmids o bacteriophage. Ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng cloning vector at expression vector ay iyon Ginagamit ang cloning vector upang magdala ng mga banyagang segment ng DNA sa isang host cell, samantalang ang expression vector ay isang uri ng isang cloning vector, na naglalaman ng mga angkop na senyas ng ekspresyon na may pinakamataas na ekspresyon ng gen.

Saklaw ng Mga Susing Lugar

1. Ano ang isang Cloning Vector - Kahulugan, Mga Uri, Gumagamit 2. Ano ang isang Expression Vector - Kahulugan, Mga Uri, Gumagamit 3. Ano ang mga pagkakatulad sa pagitan ng Cloning Vector at Expression Vector - Balangkas ng Mga Karaniwang Tampok 4. Ano ang mga pagkakaiba sa pagitan ng Cloning Vector at Expression Vector - Paghahambing ng Mga Pangunahing Pagkakaiba

Pangunahing Mga Tuntunin: Bacteriophages, Cloning Vector, Cosmids, DNA, DNA Technology, Expression Consonstr, Expression Vector, Pinagmulan ng Replication, Promoter Region, Recombinant RNA, Plasmids, Restriction sites, Selectable marker

Ano ang isang Cloning Vector

Naghahatid ang mga vector ng cloning bilang mga molekulang carrier DNA. Ang lahat ng mga cloning vector ay nagdadala ng apat na espesyal na tampok:

Maraming mga pagpipilian ng mga klasikong vector ng cloning tulad ng plasmids, phages, at cosmids depende sa layunin. Ang pagpili ng isang cloning vector ay depende sa laki ng insert at application.

Mga Plasmid

Ang mga Plasmid ay natural na nangyayari, extrachromosomal, doble-straced na mga molekula ng DNA, na may kakayahang autonomous na pagtiklop sa loob ng mga bacterial cell. Ang limitasyon sa laki ng insert sa plasmids ay 10 kb. Ang mga plasmid ay ginagamit bilang mga vector ng cloning sa subcloning at downstream na manipulasyon, clone ng cDNA at assay ng ekspresyon. Ang pBR322 ay isa sa mga unang plasmid na genetically engineered na gagamitin sa mga recombinant na teknolohiya ng DNA. Ang pBR322 plasmid ay ipinapakita sa pigura 1.

Larawan 1: pBR322

Mga Phage

Ang mga phage ay nagmula sa bacteriophage lambda kung saan pinapayagan ka ng cos site ng bacteriophage lambda na ibalot ito sa isang phage head. Ang pagtitiklop ng vector DNA sa loob ng host cell ay huli na magdudulot ng cell lysis. Ang laki ng insert na maaaring ipasok sa isang phage vector ay 5-12 kb. Ang mga vector vector ay ginagamit sa pag-clone ng genomic DNA, pag-clone ng cDNA, at mga library ng expression.

Cosmids

Ang Cosmids ay isang uri ng mga plasmid na naglalaman ng cos site ng bacteriophage lambda. Pinapayagan ka ng cos site ng bacteriophage lambda na ibalot sa isang ulo ng phage. Kahit na ito ay isang plasmid, ang pagtitiklop ng mga cosmids sa loob ng host cell ay maaaring hindi lyse ng cell tulad ng sa mga phage vector. Ang laki ng insert na maaaring mai-clone sa isang cosmid vector ay 35-45 kb. Ang mga cosmid vector ay ginagamit sa mga konstruksyon ng genomic library.

Dahil ang mga mammalian gen ay madalas na mas malaki sa 100 kb ang laki, ang kumpletong pagkakasunud-sunod ng gene ay hindi ma-clone ng mga klasikal na vector ng cloning. Ang problemang ito ay naiiwasan ng paggaya ng mga katangian ng host cell chromosome sa mga vector. Ang ganitong uri ng mga vector ay tinatawag na mga artipisyal na chromosome vector. Ang mga BAC (bacterial artipisyal na chromosome vector), YAC (yeast artipisyal na chromosome vector), at MACs (mammalian artipisyal na chromosome vector) ay mga uri ng artipisyal na chromosome vector.

Mga BAC

Ang mga bakterya ng artipisyal na chromosome vector ay batay sa Escherichia coli F factor plasmid. Ang laki ng insert na maaaring mai-clone sa isang BAC vector ay 75-300 kb. Ang mga BAC vector ay ginagamit sa pagsusuri ng malalaking genome.

Mga YAC

Ang yeast artipisyal na mga chromosome vector ay batay sa Saccharomyces cerevisiae centromere, telomere, at iba pang autonomous na pagtitiklop ng mga pagkakasunud-sunod. Ang laki ng insert na maaaring mai-clone sa isang YAC vector ay 100-1 Mb. Ginagamit ang mga vector ng YAC sa pagtatasa ng malalaking genome.

Mga MAC

Ang mga mamalyano na artipisyal na chromosome vector ay batay sa mammalian centromere, telomere at ang pinagmulan ng pagtitiklop. Ang laki ng insert sa mga MAC ay 100 kb hanggang 1 Mb. Ginagamit ang mga MAC sa biotechnology ng hayop at therapy ng pantao.

Ano ang isang Expression Vector

Mga expression vector, tinukoy din bilang expression bumuo, ay isang uri ng mga plasmid. Ang isang espesyal na gene ay ipinakilala sa isang host cell ng mga expression na vector kung saan ang pagpapahayag ng transformed gen ay pinadali ng expression vector na may paggamit ng cellular-transcriptional at translational na makinarya. Ang isang expression vector ay naglalaman ng mga pagkakasunud-sunod ng pagkontrol tulad ng mga enhancer at tagataguyod ng mga rehiyon, na hahantong sa isang mahusay na pagpapahayag ng gene. Matapos ang pagpapahayag ng isang partikular na protina tulad ng insulin sa loob ng isang host cell, ang produkto ay dapat na linisin mula sa mga protina ng host cell. Sa account na iyon, ang ipinakilala na protina ay maaaring naka-tag sa histidine (Kanyang tag) o anumang iba pang protina. Upang makakuha ng isang mahusay na pagpapahayag ng ipinakilala na gene sa loob ng isang host cell, ang mga sumusunod na signal ng expression ay dapat na ipakilala sa isang expression vector.

Larawan 2: pGEX-3X

Mga pagkakatulad sa pagitan ng Cloning Vector at Expression Vector

Pagkakaiba sa Pagitan ng Vector ng Pag-clone at Ekspresyon Vector

Kahulugan

Pag-clone ng Vector: Ang cloning vector ay isang maliit na piraso ng DNA na maaaring mapanatili nang matatag sa loob ng isang host cell. Ginagamit ito upang ipakilala ang mga gen sa mga cell habang kumukuha ng maraming mga kopya ng insert.

Expression Vector: Ang Expression vector ay isang plasmid na ginagamit upang ipakilala ang isang tukoy na gene sa isang mekanismo ng target na cell at commandeer cell upang makagawa ng nauugnay na produktong gen.

Papel

Pag-clone ng Vector: Ginagamit ang mga vector ng cloning upang makakuha ng maraming mga kopya ng ipinasok na segment ng DNA.

Expression Vector: Ginagamit ang mga vector ng expression upang makakuha ng produktong gen ng nakapasok na segment ng DNA, alinman sa isang protina o RNA.

Mga uri

Pag-clone ng Vector: Ang pag-clone ng mga vector ay maaaring plasmids, cosmids, phages, BACs, YACs, o MACs.

Expression Vector: Ang Expression vector ay isang plasmid vector.

Mga Tampok ng Vector

Cloning Vector: Ang mga vector ng clone ay naglalaman ng pinagmulan ng pagtitiklop, natatanging mga site ng paghihigpit, at isang mapipiling marker.

Expression Vector: Ang Expression vector ay naglalaman ng mga enhancer, promoter region, termination codon, transcription initiation series, at translation initiation series sa vector bilang karagdagan sa mga tipikal na tampok ng isang cloning vector.

Konklusyon

Ang mga cloning vector at expression vector ay madaling gamitin sa recombinant na teknolohiya ng DNA upang maipakilala ang mga banyagang segment ng DNA sa mga target na cell. Ang parehong mga cloning vector at expression vector ay may kakayahang magtiklop ng kanilang mga sarili sa loob ng host cell. Karaniwang ginagamit ang mga cloning vector para sa pagpapasok ng mga dayuhang gen sa mga target na cell habang nakakamit ang maraming kopya ng ipinakilalang gene. Ginagamit ang mga vector ng expression upang makuha ang produktong gen, alinman sa isang protina o RNA ng ipinakilala na gene sa loob ng host cell. Karamihan sa mga recombinant na protina tulad ng insulin ay ginawa ng paggamit ng mga expression na vector. Ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng cloning vector at expression vector ay ang aplikasyon ng bawat vector sa recombinant na teknolohiya ng DNA.

Sanggunian:

1. "Mga Cloning Vector." Pag-clone at Molecular na Pagsusuri ng mga Genes. N.p., n.d. Web Magagamit dito. 18 Hunyo 2017. 2. "Mga Shuttle Vector at Expression Vector." Walang hangganan. Walang hangganan, 26 Mayo 2016. Web. Magagamit dito. 18 Hunyo 2017.

Kagandahang-loob ng Larawan:

1. "PBR322" Ni Ayacop (+ Yikrazuul) - Sariling gawain (Public Domain) sa pamamagitan ng Wikimedia Wikimedia2. "PGEX-3X cloning vector" Ni Magnus Manske - Nilikha ni Magnus Manske (CC BY-SA 3.0) sa pamamagitan ng Wikimedia Wikimedia