Ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng pagkuha ng DNA at RNA ay ang antas ng pH ng Ang pagkuha ng DNA ay pH 8 samantalang ang antas ng pH ng pagkuha ng RNA ay pH 4.7. Ang DNA ay may kaugaliang denature at lumipat sa organikong yugto sa acidic pH. Sa alkaline pH, ang RNA ay sumasailalim sa alkaline hydrolysis dahil sa pagkakaroon ng 2 'OH sa ribose sugar.

Ang pagkuha ng DNA at RNA ay ang dalawang pamamaraan na kasangkot sa paghihiwalay at paglilinis ng mga nucleic acid mula sa mga cell ng tisyu. Ang parehong mga pamamaraan ay binubuo ng tatlong mga hakbang. Ang mabuting kalidad ng DNA at RNA ay may gampanang kritikal sa molekular biology, biotechnology, genomics, at mga eksperimento sa epidemiology.

Saklaw ng Mga Susing Lugar

1. Ano ang Extraction ng DNA - Kahulugan, Pamamaraan 2. Ano ang RNA Extraction - Kahulugan, Pamamaraan 3. Ano ang Mga Pagkakatulad sa Pagitan ng DNA at RNA Extraction - Balangkas ng Mga Karaniwang Tampok 4. Ano ang Pagkakaiba sa Pagitan ng DNA at RNA Extraction - Paghahambing ng Mga Pangunahing Pagkakaiba

Pangunahing Mga Tuntunin: Cell Lysis, Denaturation of Proteins, DNA Extraction, pH, Precipitation, RNA Extraction

Ano ang Extraction ng DNA

Ang pagkuha ng DNA ay ang paghihiwalay at pamamaraang paglilinis ng DNA. Ang DNA ay maaaring ihiwalay mula sa dugo, mga sample ng frozen na tisyu o mga block ng paraffin tissue. Ang tatlong mga hakbang sa pagkuha ng DNA ay ang cell lysis, paghihiwalay ng DNA, at pag-ulan. Sa panahon ng cell lysis, ang mga hadlang sa lamad ng cell tulad ng cell membrane at mga lamad ng nukleus ay nagbubukas upang mailantad ang DNA. Ang susunod na hakbang ay ang pagtanggal ng mga lamad ng lamad mula sa sample. Sa wakas, ang pag-ulan ng DNA ay nagsasangkot ng pagtanggal ng mga protina na nauugnay sa DNA sa pamamagitan ng protease at pag-aalis ng RNA ng RNase.

Larawan 1: Pamamaraan sa Pagkuha ng DNA

Pangunahing Mga Proteksyon ng Pagkuha ng DNA

Ipinapakita sa ibaba ang pangunahing mga protokol ng pagkuha ng DNA.

1. Ang cell lysis na may buffer ng cell lysis sa mga lyse cell membrane

2. Ang mga lipid ay pinaghiwalay ng mga detergent at surfactant

3. Pagtunaw ng mga protina sa pamamagitan ng pagdaragdag ng protease

4. Pagtunaw ng RNA sa pamamagitan ng pagdaragdag ng RNase

5. Paghihiwalay ng mga labi ng cell, mga natutunaw na protina, lipid, at RNA sa pamamagitan ng pagdaragdag ng puro asin na sinundan ng centrifugation

6. Pag-ulan ng ethanol ng DNA na may yelo-lamig na etanol o isopropanol. Ang lakas ng ionic ng sodium acetate ay maaaring magamit upang mapagbuti ang pag-ulan. Ang pinabilis na DNA ay lilitaw bilang mga thread sa huling solusyon.

Larawan 2: Kinuha ang DNA

Maaari ring magamit ang pagkuha ng phenol-chloroform upang paghiwalayin ang DNA mula sa mga protina. Dito, tinukoy ng phenol ang mga protina sa sample, at ang DNA ay nananatili sa may tubig na yugto sa pagtatapos ng pagkuha. At, sa organikong yugto, mahahanap mo ang mga itinampok na protina. Ang isa pang pamamaraan upang kunin ang DNA ay ang paglilinis ng minicolumn. Dito, ang pagbubuklod ng DNA sa haligi ay nakasalalay sa ph at ang konsentrasyon ng asin ng buffer.

Ano ang RNA Extraction

Ang pagkuha ng RNA ay tumutukoy sa proseso ng paglilinis ng RNA mula sa mga sample. Ang maginoo na pamamaraan ng pagkuha ng RNA ay tinatawag na pagkuha ng guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform. Ang Guanidinium thiocyanate ay nagtatampok ng mga protina. Bukod dito, nakakagambala sa hydrogen bonding ng mga water Molekul at nagsisilbing ahente ng chaotropic. Ang isang espesyal na reagent ay ginagamit sa pagkuha ng RNA na tinatawag na Tri-reagent. Naglalaman ito ng guanidinium thiocyanate, phenol, at sodium acetate. Ang layunin ng mga pangunahing hakbang ng pagkuha ng RNA ay katulad ng sa pagkuha ng DNA. Ang protocol para sa pagkuha ng RNA ay inilarawan sa ibaba.

1. Ang mga cell ay hinuhugasan ng may malamig na PBS upang mapanatili ang osmolarity ng mga cells.

2. Hangarin ang mga cell at homogenize ang sample na may Tri-reagent.

3. Magdagdag ng chloroform at iling.

4. Ang centrifugation ay maaaring magresulta sa tatlong mga layer. Ang tuktok na layer ay ang may tubig na layer, na malinaw. Ang gitnang layer o ang interphase ay naglalaman ng napakabilis na DNA. Ang ilalim na layer ay ang organikong layer, na kulay-rosas.

5. Tanggalin ang may tubig na layer at idagdag ang isopropanol. Ang sentrifugasyon ay maaaring magresulta sa isang pellet.

6. Hugasan ang pellet na may 75% etanol. Air dry ang pellet.

7. Dissolve ang pellet gamit ang TE buffer o tubig.

Larawan 3: Phenol-Chloroform Extraction ng RNA

Ang pagkuha ng RNA sa pangkalahatan ay isinasagawa sa pH sa ibaba 7. Sa alkaline PH, ang RNA ay mas madaling kapahamakan ng alkaline hydrolysis dahil sa pagkakaroon ng isang OH group sa 2 ′ na posisyon ng ribose sugar. Bilang karagdagan, ang RNA ay may gawi na manatili sa may tubig na bahagi sa acidic pH. Sa kabilang banda, ang DNA ay may kaugaliang denature at lumipat sa organikong yugto sa acidic PH. Samakatuwid, ang pagkuha ng DNA ay maaaring isagawa sa halos PH 8. Ang DNA ay binubuo ng deoxyribose sugar at hindi sumasailalim sa alkaline hydrolysis.

Mga Pagkakatulad sa Pagitan ng DNA at RNA Extraction

Pagkakaiba sa Pagitan ng DNA at RNA Extraction

Kahulugan

Pagkuha ng DNA: Paghiwalay at pamamaraang paglilinis ng DNA

RNA Extraction: Proseso ng paglilinis ng RNA mula sa mga sample

Uri ng Nucleic Acid na Kinuha

Pagkuha ng DNA: DNA

RNA Extraction: RNA

ph

Pagkuha ng DNA: Tapos na sa 8

RNA Extraction: Tapos na sa 4.7

Mga hakbang

Pagkuha ng DNA: Paghiwa-hiwalay ng mga lamad ng cell o cell lysis, pag-aalis ng mga lipid ng lamad, at pagsabog ng DNA

RNA Extraction: Cell lysis, guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform bunutan, paghahanda sa isopropanol

Paggamit ng DEPC-Treated Water

Pagkuha ng DNA: Wala

RNA Extraction: Ang lahat ng mga reagen ay inihanda na may tubig na ginagamot ng DEPC

Imbakan

Pagkuha ng DNA: Maaaring makuha ang DNA bago at maiimbak sa mga batch

RNA Extraction: Ang pagkuha ng RNA ay tapos na bago ang mga pamamaraang downstream

Pangmatagalang Imbakan

Pagkuha ng DNA: Sa -20 ° C

RNA Extraction: Sa -80 ° C

Konklusyon

Isinasagawa ang pagkuha ng DNA sa PH 8. Ang DNA ay may kaugaliang lumipat sa organikong yugto habang ito ay tumutukoy sa acidic pH. Ngunit, ang pagkuha ng RNA ay isinasagawa sa mababang pH upang maiwasan ang pagkasira ng alkaline hydrolysis. Ang pangunahing layunin ng mga hakbang ng parehong pagkuha ng DNA at RNA ay pareho. Ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng pagkuha ng DNA at RNA ay ang mga kundisyon ng pH na ginamit sa bawat uri ng pagkuha.

Sanggunian:

1. "Ang Mga Pangunahing Kaalaman sa pagkuha ng DNA." Alaska BioPREP Virtual Textbook, Alaska BioPREP University of Alaska Fairbanks, Magagamit Dito2. "RNA Isolation at Reverse Transcription Protocol: Mga Cell sa Kultura." abcam, Magagamit Dito

Kagandahang-loob ng Larawan:

1. "Larawan 17 01 02" Ni CNX OpenStax - (CC BY 4.0) sa pamamagitan ng Wikimedia Wikimedia 2. "Extraction ng DNA" Ni Joo Nath - Sariling gawain (CC BY-SA 4.0) sa pamamagitan ng Wikimedia Wikimedia 3. "PhOH-CHCl3 bunutan" Ni Squidonius (usapan) - Sariling gawain (Orihinal na teksto: ginawa ng sarili) (Public Domain) sa pamamagitan ng Wikimedia Wikimedia