Ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng GFP at EGFP ay ang Ang GFP (kumakatawan sa Green Fluorescent Protein) ay isang protina na nagpapakita ng maliwanag na berdeng fluorescence kapag nahantad sa asul na ilaw samantalang ang EGFP (kumakatawan sa Enhanced Green Fluorescence Protein) ay nagpapakita ng mas malakas na fluorescence kaysa sa GFP. Bukod dito, ang isa pang mahalagang pagkakaiba sa pagitan ng GFP at EGFP ay ang GFP ay isang ligaw na uri ng protina na nakahiwalay sa dikya, Aequorea victoria. Ngunit, ang EGFP ay isang engineered na variant ng orihinal na wild-type.

Ang GFP at EGFP ay dalawang uri ng mga protina na nagsisilbing panloob na chromophores. Hindi sila nangangailangan ng anumang mga accessory enzyme / substrates, cofactor o mga produkto ng gene upang maipakita ang kulay nito. Samakatuwid, pareho ang ginagamit bilang isang reporter ng expression ng gene sa molekular biology.

Chromophore, EGFP, GFP, Green Fluorescence, Wild-Type Protein

Ano ang GFP

Ang GFP (green fluorescent protein) ay isang protina na kumikinang na berde sa ilalim ng asul o UV na ilaw. Ito ay natural na nangyayari sa dikya, Aequorea Victoria. Ang GFP ay binubuo ng 238 mga amino acid. Ang laki ng GFP ay 26.9 kDa. Ang GFP ay isang malakas na tool sa molekular biology dahil sa intrinsic fluorescence na walang anumang accessory Molekyul. Ang fluorescence ay dahil sa covalent rearrangement ng magkadikit na mga amino acid ng protina. Matapos ang pagtitiklop ng protina, ang pangunahing mga atom ng kadena, Ser65, Tyr66 at Gly67 ay bumubuo ng mataas na conjugated, planar p -hydroxybenzylideneimidazolinone chromophore sa pagkakaroon ng O₂. Ang mga pag-aaral ng istrakturang kristal ay nagbubunyag na ang pag-iimpake ng chromophore sa loob ng core ng istrakturang barrel-bariles ng molekula ay pinoprotektahan ito mula sa pagsusubo sa pamamagitan ng paramagnetic oxygen, water dipoles o cis-trans isomerization. Bilang karagdagan, ang mga pakikipag-ugnayan na hindi covalent ng chromophore sa mga kalapit na mga molekula ay nagpapabuti ng mga katangian ng mulak.

Larawan 1: Kinatawan ng Ribbon ng GFP at Fluorophore

Ang GFP ay maaaring ipakilala sa isang organismo sa panahon ng mga pagbabago sa transgenic. Maaari rin itong mapanatili sa mga henerasyon. Ang pangunahing sagabal ng ligaw na uri ng GFP ay ang nabawasan na pagiging epektibo ng protina sa imaging ng cell na sanhi ng mababang natitiklop na kahusayan sa mga pisyolohikal na temperatura tulad ng 37 ° C, na bumabagsak sa signal ng fluorescent. Gayundin, ang rate ng pagkahinog ng GFP sa loob ng host cell ay mabagal habang may posibilidad na magsama-sama. Ang dalawang mga tuktok sa paggulo ay maaaring sundin dahil sa pagkakaroon ng dalawang magkakaibang mga anyo ng chromophore. Gayunpaman, nalutas ng engineering ng protina ang karamihan sa mga problema sa pamamagitan ng pagpapakilala ng mga iba't ibang anyo ng ligaw na uri ng GFP.

Ano ang EGFP

Ang EGFP (pinahusay na green fluorescence protein) ay isang pagkakaiba-iba ng ligaw na uri ng GFP na may mas mataas na intensidad na paglabas patungkol sa GFP. Ito ay isa sa una at pinakamahalagang variant ng GFP. Ang dalawang mutasyon, F64L at S65T, ay bumubuo ng EGFP na may isang mas mahusay na natitiklop na kahusayan sa 37 ° C. Kapansin-pansin, ang EGFP ay may isang solong rurok ng paggulo sa ~ 490 nm dahil sa pagsugpo ng 395 nm na rurok ng S65T dahil binago nito ang naka-ionize na estado ng Glu222 na malapit. Sa kabilang banda, pinatataas ng F64L ang kahusayan ng natitiklop na 37 ° C. Mahalaga, ang pagkakasunud-sunod ng codon ng EGFP ay na-optimize para sa pagpapahayag sa mga mammalian cell.

Larawan 2: EGFP Expression

Mga Pagkakatulad sa pagitan ng GFP at EGFP

Pagkakaiba sa pagitan ng GFP at EGFP

Kahulugan

GFP: Isang ligaw na uri ng protina na nagpapakita ng berdeng pag-ilaw sa ilalim ng asul o UV na ilaw at natural na nangyayari sa dikya, Aequorea Victoria

EGFP: Isang variant ng ligaw na uri ng GFP na may mas mataas na intensidad na paglabas patungkol sa GFP

Ibig sabihin

GFP: Green Fluorescence na protina

EGFP: Pinahusay na berdeng protina ng fluoresensya

Pinanggalingan

GFP: Wild-type

EGFP: Mutant

64^ika Amino Acid

GFP: Phenylalanine

EGFP: Leucine

65^ika Amino Acid

GFP: Serine

EGFP: Threonine

Liwanag ng Kulay

GFP: Maliwanag na berde

EGFP: Mas maliwanag na berde

Excitation Peaks

GFP: Dalawang tuktok (395 nm at 490 nm)

EGFP: Solong rurok (490 nm)

Kahusayan sa Folding sa 37 ° C

GFP: Mababa

EGFP: Mataas

Konklusyon

Ang GFP ay ang ligaw na uri ng protina na nagpapakita ng maliwanag na berdeng fluorescence kapag nahantad sa asul o UV na ilaw. Ang EGFP ay isang variant ng GFP na nagpapakita ng mas mataas na intensidad na fluorescence kung ihahambing sa GFP. Kaya, ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng GFP at EGFP ay ang tindi ng berdeng fluorescence na inilalabas ng bawat protina.

Sanggunian:

1. Arpino, James A. J., et al. "Istrakturang Kristal ng Pinahusay na Green Fluorescent Protein sa 1.35 Å Ang Resolusyon ay Nagpapakita ng Mga Alternatibong Pag-uugnay para sa Glu222." PLOS Medicine, Public Library of Science, journal.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0047132.

Kagandahang-loob ng Larawan:

1. "Gfp at fluorophore" Ni Raymond Keller (Raymond Keller (talk)), sa ilalim ng auspices ng Crystal Protein. - Sariling gawain (Public Domain) sa pamamagitan ng Wikimedia Wikimedia 2. “Fgams ppat egfp puncta” Ni Zhao A, Tsechansky M, Swaminathan J, Cook L, Ellington AD, et al. (2013) Transiently Transfected Purine Biosynthetic Enzymes Form Stress Bodies. PLoS ONE 8 (2): e56203. doi: 10.1371 / journal.pone.0056203 (CC BY 3.0) sa pamamagitan ng Wikimedia Wikimedia